定量PCR技术快速分析噬菌体展示肽库的应用

作者：邬兰; 杜同信; 俞杨; 焦杰; 王自正

来源：标记免疫分析与临床, 2016, 23(10): 1207-1211.

DOI：10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.10.022

• 噬菌体展示
• 实时荧光定量聚合酶链反应
• 文库筛选

目的建立无需转染菌株的快速定量方法,用以分析噬菌体展示肽库筛选。方法选取Ph.D.-C7C噬菌体展示肽库,进行梯度稀释并提取基因组,在其载体序列上设计一对通用引物,运用SYBR Green的方法进行荧光定量PCR扩增,通过计算该方法的特异性、精密度和线性范围来确定该检测方法的可行性。结果通过溶解曲线得知该对引物可特异性筛选噬菌体展示七肽库。通过计算每个浓度的Ct值及其偏差可发现,该体系在2×104pfu/m L2×1010pfu/m L的浓度范围内线性关系良好,且在2×105pfu/m L2×1010pfu/m L的浓度范围内批间不精密度小于15%。结论建立的荧光定量PCR体系可以避免转染菌株所带来的繁琐人工劳动,并可以特异、准确、快速的对噬菌体展示肽库进行定量分析。

• 出版日期2016
• 单位南京医科大学; 南京市第一医院