单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建

作者：吴映雅; 谭宇蕙; 宁异真; 杜标炎; 李杰芬

来源：中国现代医学杂志, 2008, (03): 275-278+282.

• HSV1-tk/GCV
• 自杀基因
• 绿色荧光蛋白
• 肿瘤 HSV1-tk/GCV
• suicide gene
• green fluorescent protein
• tumor

目的建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础。方法DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达载体pTKGFP,用酶切鉴定并进行序列测定;polyFect转染液对鼠黑色素瘤细胞B16进行转染,荧光显微镜观察基因表达情况,MTT法检测转化细胞B16对GCV的敏感性。结果重组质粒pTKGFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,TK基因已经成功与GFP基因连接,连接处无移码突变产生;荧光显微镜下观察显示,TK-GFP融合基因在B16中获得表达。其在细胞中的定位与文献资料一致,TKGFP主要集中于胞核区而GFP弥散分布于胞质中。TKGFP组细胞对GCV的敏感性大于对照组细胞,差异有显著性。结论构建了pTKGFP融合蛋白基因表达载体,并成功在B16中进行表达,所表达的融合蛋白具有TK活性和GFP的荧光活性,可用于后续性的体外与体内实验。

• 出版日期2008
• 单位广州中医药大学