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摘要
目的:阐述单克隆抗体anti-SraPL-Lectin在小鼠巨噬细胞吞噬杀伤金黄色葡萄球菌过程中的功能。方法:PCR扩增sraP相应基因片段,并克隆至pET28a表达载体,用0.1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,镍柱纯化重组蛋白,经Western blot分析anti-SraPL-Lectin的特异性,采用qPCR检测巨噬细胞炎症因子诱导表达水平,CCK8检测金黄色葡萄球菌的增殖抑制率,涂板计数巨噬细胞上清和裂解液中金黄色葡萄球菌的菌落数。结果:anti-SraPL-Lectin不仅能与不同截短类型的SraP重组蛋白结合,而且能与金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白发生特异性结合;anti-SraPL-Lectin能下调小鼠巨噬细胞促炎因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-12p40]的表达并上调抑炎因子(IL-10)的表达。庆大霉素和anti-SraPL-Lectin共同作用下,未见金黄色葡萄球菌出现明显的增殖。anti-SraPL-Lectin能降低巨噬细胞上清中金黄色葡萄球菌的载量。结论:单克隆抗体anti-SraPL-Lectin与金黄色葡萄球菌形成免疫复合物能减轻巨噬细胞的炎症反应,促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除。
- 出版日期2019
- 单位解放军总医院; 南昌大学第二附属医院
