适应H9亚型禽流感病毒增殖的重组R-MDCK细胞系的建立

作者：吴亚丽; 宋玉慧; 徐倩; 潘梦梦; 张剑; 武志丹; 李新生

来源：中国兽医学报, 2016, 36(04): 579-584.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.04.07

• ST3GalⅠ基因
• 重组质粒
• H9亚型AIV
• 重组MDCK细胞

克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒p IRES中,构建重组质粒p IRES-ST3GalⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染MDCK细胞,用G418抗性筛选稳定表达的重组细胞R-MDCK。PCR及RT-PCR鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将不同H9亚型禽流感病毒毒株按相同滴度接种R-MDCK细胞和空白MDCK细胞,通过HA试验和TCID50试验,检测不同H9亚型禽流感病毒毒株在R-MDCK细胞上的增殖效果。结果发现,所有H9亚型禽流感病毒毒株在RMDCK细胞HA和TCID50结果均显著高于空白MDCK细胞。ST3GalⅠ基因在第12代R-MDCK细胞中仍能稳定表达,R-MDCK细胞可显著提升H9亚型低致病性禽流感病毒培养的滴度,可以替代鸡胚用于H9亚型低致病性禽流感病毒的生产。

• 出版日期2016
• 单位河南农业大学