Chelex 100树脂快速提取动物组织基因组DNA方法的评估

作者：栗冬梅; 梁艳林; 宋秀平; 朱彩英; 康央

来源：中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(03): 286-291.

• Chelex 100
• 动物组织
• 脱氧核糖核酸
• 实时荧光定量PCR
• 病原体
• 即时检验

目的应用基于Chelex 100树脂的6种不同处理方法提取动物组织核酸,比较6种处理之间及与磁珠法之间的差异,筛选适用于现场检测、简便快速的动物组织基因组DNA提取方法。方法取适量啮齿动物肝组织,研磨或剪碎后加入5%Chelex 100树脂悬液,应用6种不同的裂解与吸附步骤处理该悬液;经离心或静置处理后收获上清液即为组织基因组DNA,检测其浓度与纯度;以此DNA为模板,应用啮齿动物线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因的引物、巴尔通体通用引物和TaqMan探针扩增COⅠ基因片段和巴尔通体的tmRNA基因片段;比较6种Chelex100树脂处理方法之间及Chelex 100树脂法与磁珠法提取的基因组DNA浓度、纯度及扩增所得循环值(quantification cycle,Cq)的差异。结果基于Chelex 100树脂的6种不同处理方法(C1～C6)所获DNA模板浓度在203.93～769.86 ng/μl之间,比磁珠法提取的DNA模板浓度偏高;Chelex 100树脂法提取的DNA模板吸光度(A)值A260/A280比值在1.25～1.47之间,磁珠法的A260/A280比值在1.85～1.95之间,C1～C6之间无差别,但纯度低于磁珠法;电泳图显示,相较于磁珠法,Chelex 100树脂法提取的DNA模板没有明确DNA条带,前者DNA条带明显;COⅠ基因的扩增产物电泳带清晰且长度准确;对Chelex 100树脂法的DNA模板进行荧光定量PCR扩增,各样品均可获得正常Cq值,但略高于磁珠法。结论应用Chelex 100树脂法提取动物组织基因组DNA简便、高效,适用于常规PCR及TaqMan探针荧光定量PCR方法鉴定宿主动物及直接检测动物组织DNA中的病原体。

• 出版日期2019
• 单位中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室; 山东大学; 山东第一医科大学; 生命科学学院