干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体基因在胃癌进展中的作用

作者：翟文斯; 陈陆俊; 郑晓; 胡文蔚; 吴晨; 王琦; 卢斌峰; 蒋敬庭

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(04): 638-641.

• 干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体
• 胃癌
• RNA干扰

目的探讨干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体(IFIT2)在人胃癌进展中的作用及机制。方法通过使用RNA干扰(RNAi)技术构建IFIT2稳定下调表达的人胃癌细胞株SGC-7901及AGS,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别在RNA水平和蛋白水平验证两株细胞株LV-IFIT2-短发卡RNA(shRNA)组的IFIT2的表达水平,进一步研究IFIT2在人胃癌细胞株中的生物学功能。结果 Real-time PCR检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组IFIT2 mRNA表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.426±0.140比1.000±0.157,P=0.004;AGS:0.232±0.090比1.000±0.194,P=0.003);蛋白质印迹检测结果显示,SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组的IFIT2的蛋白表达水平均显著低于LV-NC组(SGC-7901:0.344±0.041比1.000±0.062,P=0.002;AGS:0.091±0.001比1.000±0.106,P=0.000)。对稳定转染LV-IFIT2-shRNA及LV-NC的人胃癌细胞系SGC-7901和AGS进行CCK-8增殖实验、划痕实验、Transwell实验和细胞周期测定。在培养的48、72 h shRNA组的吸光度值显著高于LV-NC组,提示下调IFIT2的表达可以显著抑制人胃癌细胞系SGC-7901和AGS的增殖能力(SGC-7901:48 h:0.348±0.031比0.276±0.026,P=0.013;72h:0.523±0.042比0.411±0.027,P=0.004;AGS:48h:0.454±0.034比0.362±0.038,P=0.011;72 h:0.696±0.053比0.553±0.030,P=0.003);划痕实验显示SGC-7901和AGS细胞IFIT2干扰组的迁移能力明显高于NC组的迁移能力,提示IFIT2表达的降低可明显增强SGC-7901和AGS细胞的迁移能力(SGC-7901:0.640±0.029比0.447±0.056,P=0.006;AGS:0.444±0.036比0.166±0.034,P=0.001);Transwell侵袭实验中,LV-IFIT2-shRNA组的结晶紫染色迁移细胞数明显多于LV-NC组,表明SGC-7901和AGS细胞下调IFIT2表达后的侵袭能力提高(SGC-7901:299.3±45.6比162.3±25.9,P=0.011;AGS:404.0±44.5比235.0±30.0,P=0.003);流式细胞术分析细胞周期显示,LV-IFIT2-shRNA组的S期细胞比例高于LV-NC组,提示人胃癌细胞系中IFIT2的敲除可显著影响细胞周期。结论 IFIT2表达降低可促进胃癌进展,并可预测患者的不良预后。

• 出版日期2018
• 单位苏州大学附属第三医院; 苏州大学