大肠杆菌细胞周质底物结合蛋白gsiB基因的克隆及其表达条件的优化

作者：王中山; 向泉桔; 王海燕; 张义正

来源：遗传, 2010, (05): 505-511.

• 大肠杆菌
• 谷胱甘肽转运系统
• 细胞周质底物结合蛋白
• gsiB基因
• 基因表达
• 蛋白质印迹 Escherichia coli
• glutathione transporter
• periplasmic solute-binding component
• gsiB
• gene expression
• Western blotting

为深入研究大肠杆菌谷胱甘肽转运系统的蛋白质结构和功能,对该系统中的gsiB基因进行了克隆和表达条件的优化。根据大肠杆菌谷胱甘肽转运系统中底物结合蛋白gsiB基因序列,利用PCR方法扩增到该基因的编码区序列,利用SLIC(Sequence and ligation–independent cloning)方法直接将其插入pWaldo-GFPe中,成功构建了重组表达质粒pWaldo-GFP-GsiB。将重组质粒转化不同的大肠杆菌表达菌株进行诱导表达,通过改变培养温度和IPTG浓度等条件,得到了能够大量表达目标蛋白的重组子。结果表明:大肠杆菌BL21(DE3)是gsiB基因表达的最佳宿主菌;18℃低...

• 出版日期2010
• 单位四川大学