K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制

作者：樊芳; 马清敏; 赵智华; 李科军; 赵晓彬; 田净净; 贾志旸^*

来源：眼科新进展, 2021, 41(04): 301-305.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2021.0063

• K115
• 转化生长因子-β1
• 人Tenon囊成纤维细胞
• 青光眼
• 细胞增殖
• 细胞迁移

目的探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法人Tenon囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者。采用CCK-8实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出TGF-β1对细胞增殖最佳作用浓度为5.0μg·L-1,最佳作用时间为24 h; K115对细胞增殖起始作用浓度为5.0μmol·L-1,最佳作用浓度为10.0μmol·L-1。依据这两个浓度进行分组,分别是对照组(不加TGF-β1与K115),TGF-β1组(加5.0μg·L-1 TGF-β1),TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组(加5.0μg·L-1TGF-β1和5.0μmol·L-1的K115),TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组(加5.0μg·L-1 TGF-β1和10.0μmol·L-1的K115)。采用Transwell实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞迁移的影响;免疫荧光法测定人Tenon囊成纤维细胞中α-SMA蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。对实验所得各指标进行统计学分析。结果本研究细胞培养状态良好,6～8周可见人Tenon囊成纤维细胞铺满培养瓶瓶底。用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组、TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组光密度值分别为0.977±0.042、1.306±0.059、0.862±0.035、0.558±0.042,TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组、TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组光密度值均小于TGF-β1组(均为P<0.05),并且呈现浓度依赖性减小,K115浓度越大细胞增殖减少幅度越大。Transwell实验结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组、TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组迁移细胞数分别为(38.67±3.06)个、(81.00±4.00)个、(44.33±3.21)个、(23.67±2.52)个;TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组与TGF-β1组比较,迁移细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组与对照组及TGF-β1组比较,迁移细胞数均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。各组细胞内α-SMA蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组人Tenon囊成纤维细胞胞浆内可见散在分布的绿色荧光物质,TGF-β1处理后24 h(TGF-β1组),胞浆内绿色丝状荧光物质明显增加,荧光强度差异有统计学意义(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组和TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组细胞胞浆内的荧光强度呈浓度依赖性减弱,K115浓度越高荧光强度减弱越明显(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞凋亡率为(2.400±0.346)%,TGF-β1组为(0.900±0.173)%,TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组为(1.333±0.252)%,TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组为(1.067±0.058)%;TGF-β1组的细胞凋亡率较对照组降低(P<0.05); TGF-β1+5.0μmol·L-1 K115组和TGF-β1+10.0μmol·L-1 K115组的细胞凋亡率均较对照组降低(均为P<0.05),而与TGF-β1组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移有明确的抑制作用,其作用机制可能与K115抑制了TGF-β1诱导的细胞内α-SMA的表达进而调控了细胞活化有关。

• 出版日期2021
• 单位河北省人民医院