口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析

作者：骆继怀; 杨利恒; 高闪电; 独军政; 常惠芸; 薛慧文

来源：甘肃农业大学学报, 2012, (03): 7-12.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2012.03.002

• 口蹄疫病毒
• 3D基因
• 非结构蛋白
• 反应原性分析 foot-and-mouth disease virus(FMDV)
• 3D gene
• non-structural protein
• reactivity analysis

采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性;以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53ku左右;ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上;Western-blot分析表...

• 出版日期2012
• 单位家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学