禽流感病毒H7N9人源性单链抗体文库的构建及鉴定

作者：迟莹; 张文帅; 焦永军^*

来源：江苏预防医学, 2019, 30(06): 611-613.

DOI：10.13668/j.issn.1006-9070.2019.06.006

• 禽流感病毒H7N9
• 人源性单链抗体
• 抗体文库(scFv)

目的构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库(scFv),并对文库质量进行鉴定。方法分离11例H7N9恢复期患者外周血中的单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA;并以此为模板PCR扩增人源性抗体重链可变区(VH)及轻链可变区(Vκ),再通过重叠PCR法将VH和Vκ基因随机拼接成scFv文库;将构建的scFv文库克隆入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化感受态细胞XL1-Blue,制备成完整的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库;通过计算菌落数量及基因测序检测分析scFv文库的库容量及多样性。结果构建的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库的库容为1.67×107,测序结果显示scFv文库多样性好,scFv基因阳性率为94.0%,准确率为95.7%。结论成功构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库,为后续筛选特异性中和抗体提供了基础。

• 出版日期2019
• 单位江苏省疾病预防控制中心