大豆氨基酸透性酶基因GmAAP2-like 1的克隆及功能初探

作者：李美美; 夏铜梅; **; 梅圆圆; 王宁宁

来源：植物生理学报, 2016, 52(01): 85-91.

DOI：10.13592/j.cnki.ppj.2015.0651

• 大豆
• 氨基酸透性酶
• 缺氮
• 融合PCR
• 氨基酸运输

氨基酸透性酶(amino acid permeases)在植物不同器官的氨基酸转运过程中发挥着重要作用,但迄今为止,大豆中氨基酸透性酶相关的研究甚少。本文利用大豆初生叶水培系统对大豆(Glycine max)品种‘Williams 82’进行缺氮处理后,发现与足氮对照相比,大豆初生叶中Gm AAP2-like 1基因的表达明显上调。对大豆不同器官中Gm AAP2-like 1的转录水平进行RTPCR检测,结果显示该基因在花、叶和茎中的表达量较高而在根和种子中表达量很低。构建Gm AAP2-like 1(无内含子)过表达植物表达载体,在转化农杆菌时发现,该载体转化农杆菌GV3101致死;改进载体构建策略,采用融合PCR方法,在Gm AAP2-like 1的第一个外显子后插入一段内含子序列,改进的载体可以成功转化农杆菌。应用农杆菌介导的花苞浸泡法转化拟南芥,对所获得的转基因拟南芥抗性苗进行基因组PCR和RT-PCR鉴定,共检测到8个Gm AAP2-like 1不同程度表达的转基因拟南芥株系,且其中的内含子都得到了正确的剪切。氨基酸有毒类似物(MSX)处理实验表明:转基因拟南芥对MSX处理比野生型更为敏感,暗示Gm AAP2-like 1具有运输谷氨酸等酸性氨基酸的功能。

• 出版日期2016