大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在毕赤酵母中的表达及鉴定

作者：陈明; 李超; 王瑞; 王秋华; 黄婷; 雷爱莹; 陈福艳; 甘西; 余晓丽; 梁万文

来源：西南农业学报, 2010, (06): 2093-2097.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2010.06.009

• 大肠杆菌肠毒素B亚单位(LTB)
• 基因表达
• 毕赤酵母
• 粘膜免疫佐剂 LTB(heat-labile enterotoxin subunit B)
• Gene expression
• Pichia pastoris
• Mucosal immune adjuvant

为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核表达载体pPIC9K-LTB;重组质粒经核苷酸测序确认并线性化后电转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选转化子,并以小量诱导表达筛选高效表达工程菌株,最后Western blotting分析甲醇诱导上清中的LTB及采用亲和层析和HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化蛋白。结果表明,PCR克隆获得的LTB编码DNA序列与GenBank登录DNA序...

• 出版日期2010
• 单位广西壮族自治区水产科学研究院