青鳉脑型芳香化酶cyp19b基因的敲除和鉴定

作者：常宇阳; 武小雯; 郭海燕; 关桂君^*

来源：生物学杂志, 2021, 38(03): 63-67.

• 青鳉
• cyp19b基因
• 基因敲除
• CRISPR/Cas9

芳香化酶是调节雄激素向雌激素合成转换的关键酶。脑型芳香化酶(cyp19b)的表达在成鱼青鳉的脑中呈现显著雌雄性差异,在性腺中微弱表达且无明显性别差异。为探讨cyp19b基因的生理功能,采用CRISPR/Cas9系统靶向敲除cyp19b基因。在青鳉cyp19b基因的第2和第4外显子上分别设计一个靶位点,通过显微注射gRNA和Cas9蛋白到一细胞期的受精卵进行cyp19b双靶点基因敲除。研究结果表明:成功获得两种可遗传的cyp19b突变等位基因型种鱼,并通过杂合子交配、基因组PCR及DNA测序分析,选育得到两种cyp19b敲除突变型纯合子品系。表型观察分析显示,两种突变型纯合子品系均无明显雌雄性偏差,胚胎均可以正常发育,成鱼均可以正常生殖,提示cyp19b基因的缺失可能不直接影响性腺的雌雄性分化。cyp19b基因如何影响性腺分化和发育,有待进一步深入探讨。

• 出版日期2021
• 单位上海海洋大学; 农业部