克里米亚-刚果出血热病毒特征核酸序列克隆载体的构建

作者：李云峰; 蔡鹏; 臧宇婷; 石楠; 葛藤; 薛芳; 宋锋林; 吴刚; 于畅

来源：中国国境卫生检疫杂志, 2012, (03): 172-175.

DOI：10.16408/j.1004-9770.2012.03.017

• 克里米亚-刚果出血热
• 克里米亚-刚果出血热病毒
• 逆转录聚合酶链反应
• 核酸序列
• 克隆载体
• 检测

目的构建含有克里米亚-刚果出血热病毒特征序列的克隆载体。方法设计RT-PCR引物及反应体系,从克里米亚-刚果出血热病毒RNA中扩增获得目的序列,进行分离纯化和回收,将纯化的扩增片段与pMD18-T载体进行连接,进行酶切鉴定与测序鉴定。结果确定检测克里米亚-刚果出血热病毒一步法RT-PCR的反应条件及体系,引物终浓度为400 nmol/L,反应条件为:50℃30 min,94℃4 min,94℃30s,57℃30 s,72℃30 s,35cycles.成功将CCHF的特征序列片段克隆,pMD18-T载体经DNA测序鉴定正确。结论构建的pMD18-CCHF质粒,可用于克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR实验的阳性对照。

• 出版日期2012-6-25