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摘要
目的 探讨左归丸治疗骨质疏松（OP）多靶点的分子机制。方法 采用0、100、200、400、1 000μg/mL浓度的左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞，Western Blot检测总β-连环蛋白（β-catenin）、活性β-catenin、成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)、成骨细胞特异性转录因子（Osx）蛋白表达，qPCR检测Runx2、Osx、Ⅱ型α胶原蛋白基因（Col2a1）、骨钙蛋白（Ocn）、β-catenin mRNA表达，CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活力，碱性磷酸酶（ALP）染色及茜素红染色（ARS）检测MC3T3-E1细胞成骨细胞分化能力，RNA-Seq筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的差异基因并进行qPCR验证。结果 不同浓度左归丸溶液（100、200、400、1 000μg/mL）干预MC3T3-E1细胞48 h，成骨标志基因（Runx2、Osx、Col2A1、Ocn、β-catenin）表达水平明显升高（P<0.05）,MC3T3-E1细胞增殖率明显升高（P<0.05）,ALP、ARS染色明显增强（P<0.05），其中以400μg/mL左归丸溶液干预效果最明显。当左归丸溶液干预浓度达到1 000μg/mL,MC3T3-E1细胞成骨分化能力显著下降（P<0.05）。采用400μg/mL左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞48 h,RNA-seq筛选出10个差异最大基因，其中6个上调基因和4个下调基因，qPCR验证发现，EF-Hand钙结合域9(Efcab9)、叉头框蛋白J1(Foxj1) mRNA表达水平升高（P<0.05）,Ras蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RasGRF1)、生长分化因子-9(GDF9)、Ⅳ型胶原蛋白α-3链（Col4a3） mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论 左归丸溶液（400μg/mL）能够调节Efcab9、FOXj1、RasGRF1、GDF-9、Col4a3 mRNA表达水平，促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化。
- 出版日期2023
- 单位柳州市中医医院; 广州中医药大学深圳医院; 广州中医药大学
