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摘要
目的:阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)患者的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)水平在脑内异常代谢、沉积是AD发病的核心环节,而突触丢失、神经元脱失和线粒体变化是AD患者重要的组织形态学改变之一,其丢失程度与老年性痴呆的严重程度密切,探讨中药复方还脑益聪方含药血清对APP/PS1双基因转染细胞超微结构及细胞β淀粉样蛋白40(β-amyloid protein40,Aβ40)、β淀粉样蛋白42(β-amyloid protein42,Aβ42)和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)水平的影响。方法:高效液相色谱法测定,还脑益聪方(何首乌、人参、黄连等组成)提取物含有大黄素、二苯乙烯苷、人参皂苷Re、Rb1、Rg1、阿魏酸和小檗碱等7种主要成分。建立SD大鼠含药血清干预APP/PS1双基因转染细胞的培养体系,实验分为①正常培养细胞;②7.5%含药血清孵育细胞株;③15%含药血清孵育细胞株;④DAPT组,0.15nmDAPT孵育细胞株;⑤直接给药组,0.31mg/ml还脑益聪方提取物孵育细胞株。用Cell Counting-8法检测中药含药血清对APP/PS1双基因转染细胞的生长活力影响,观察APP/PS1双基因转染细胞的超微结构;用ELISA方法检测含药血清对APP/PS1双基因转染细胞培养上清液中Aβ40、Aβ42和APP含量的影响。结果:透射电镜显示APP/PS1双基因转染细胞的核膜界限模糊,细胞内线粒体嵴溶解断裂、数量减少,胞质内脂褐素增加,中药复方还脑益聪方含药血清对细胞形态有一定的修复作用。ELISA检测结果表明,APP/PS1双基因转染细胞中分泌的APP、Aβ_(40)、Aβ_(42)蛋白较HEK293细胞显著增加。中药复方还脑益聪方含药血清对APP/PS1双基因转染细胞分泌的APP、Aβ_(40)、Aβ_(42)蛋白有显著地抑制作用(P<0.05,P<0.01),7.5%含药血清效果最好。结论:文献研究发现AD并不是由单一信号通路所介导,调控疾病网络某一节点的单靶点药物不能满足治疗AD的复杂疾病,针对诱发疾病的多个靶点、多个节点蛋白同时干预,从而调控整个疾病机制网络的多靶点药物有望成为治疗AD更优的策略。中药复方还脑益聪方对APP/PS1双基因转染细胞株的APP、Aβ_(40)、Aβ_(42)有显著地抑制作用,进而阻止细胞形态的变化和损伤,是中药复方对APP/PS1损伤细胞的作用机制之一。
- 出版日期2014
- 单位中国中医科学院西苑医院
