A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析

作者：孙涛; 雷质文; 邓明俊; 王群; 郑小龙; 梁成珠; 曹丙蕾; 凌宗帅

来源：中国兽医学报, 2014, 34(09): 1471-1475+1506.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2014.09.012

• 计量学
• 禽流感病毒
• 荧光定量RT-PCR
• 标准样品 metrology
• avian influenza virus
• real-time RT-PCR
• reference materials

利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量(拷贝),并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃(相对湿度20%~50%)14d,2~8℃...

• 出版日期2014
• 单位中华人民共和国山东出入境检验检疫局