大鼠重组骨桥蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达和纯化

作者：敬佳; 李文瑾; 刘传亮; 曲思盈; 崔英哲; 穆莉莉; 孔庆飞; 李呼伦; 王广友

来源：国际免疫学杂志, 2016, 39(6): 539-542,546.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2016.06.003

• 重组骨桥蛋白
• CHO细胞
• 表达
• 纯化

目的 构建包含大鼠骨桥蛋白(OPN)的真核表达载体,获得稳定表达重组蛋白的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株并对蛋白进行纯化,为OPN在大鼠模型实验中的进一步功能学研究奠定基础.方法 通过脂质体lipofectamine 2000将重组质粒pLVX-OPN转染到CHO细胞中,嘌呤霉素筛选出稳定克隆细胞.Real-time PCR法检测转染后CHO细胞中OPN的mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测上清中OPN分泌水平.取CHO细胞72 h无血清培养上清进行镍柱亲和层析纯化,ELISA法和Western blot法分别检测产量和纯度.结果 pLVX-OPN表达载体经DNA琼脂糖电泳鉴定为阳性,且质粒测序成功.经质粒pLVX-OPN转染的CHO细胞中OPN mRNA表达水平是转染前的上千倍,上清分泌蛋白水平较转染前增加.上清分泌的OPN蛋白通过镍柱亲和层析纯化后纯度有所提高,产量在30％以上.结论 pLVX-OPN真核表达载体的成功构建和在CHO细胞中的稳定表达及纯化为OPN的功能学研究提供了有效工具.

• 出版日期2016
• 单位哈尔滨医科大学