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摘要
目的以小胶质细胞与星形胶质细胞建立共培养模型,研究铅、锰单独及联合暴露下不同类型胶质细胞的反应及小胶质细胞活化对星形胶质细胞功能的影响。方法先通过MTT法筛选对C6星形胶质细胞生长无影响的铅和锰的暴露剂量和作用时间,再选取BV2小胶质细胞和C6细胞以铅、锰单独及联合染毒建立细胞模型。分为直接刺激法、条件培养基法和共培养法3种细胞模型。直接刺激法采用完全培养基或含醋酸铅、氯化锰培养基直接作用于C6细胞24 h;条件培养基法采用完全培养基或含铅、锰培养基作用于BV2细胞24 h,取上清经离心后作用于C6细胞24 h;共培养法将BV2细胞接种于TranswellTM共培养模型上层小室内,再将上层小室置入空白12孔板内,将C6细胞接种于另一12孔板内,以完全培养基或含铅、锰培养基作用接种于TranswellTM共培养模型上层小室内的BV2细胞,24 h后弃去培养基,以完全培养基轻柔洗涤后,将含BV2细胞的上层小室置入接种C6细胞的12孔板内继续培养24 h。采用Western blot法检测补体受体3(CR3/CD11b/OX42)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平,确定铅、锰单独及联合暴露下对不同类型胶质细胞的影响;检测谷氨酰胺合成酶(GS)水平确定小胶质细胞的活化对星形胶质细胞谷氨酸-谷氨酰胺循环环路的影响。结果直接刺激模型中,10μmol/L铅、100μmol/L锰作用星形胶质细胞24 h,铅、锰单独及联合暴露不能引起星形胶质细胞显著活化及其GS表达的改变;条件培养基模型中,10μmol/L铅、100μmol/L锰作用于BV2小胶质细胞24 h,BV2小胶质细胞OX42表达水平显著升高,将其培养基作用于C6星形胶质细胞24 h后,C6细胞GFAP表达显著性升高,GS表达显著性降低;共培养模型中,10μmol/L铅、100μmol/L锰作用于BV2小胶质细胞24 h,BV2小胶质细胞OX42表达水平显著升高,将其洗涤后与C6星形胶质细胞共培养24 h后,星形胶质细胞GFAP表达显著性升高,GS表达显著性降低。结论低剂量铅、锰单独及联合暴露能够引起体外培养的小胶质细胞活化,而活化的小胶质细胞能够诱导星形胶质细胞活性增强及GS表达水平降低,且铅锰联合暴露比单独暴露效应更为显著。
- 出版日期2016
- 单位第四军医大学
