沉默lncRNA LINC00472对脂多糖诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

作者：邓琳; 贺健祥; 金蕾^*

来源：山东医药, 2022, 62(13): 56-61.

• 急性肾损伤
• 肾小管上皮细胞
• 长链非编码RNA LINC00472
• 微小RNA-136-3p
• 基因沉默
• 程序性细胞死亡因子4

目的 探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472对脂多糖（LPS）诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制。方法 体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2（以下称HK-2细胞），随机分为对照组、LPS组、LPS+siLINC00472组、LPS+si-NC组、LPS+miR-136-3p组、LPS+miR-NC组、LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组和LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组。LPS+si-LINC00472组转染si-LINC00472,LPS+si-NC组转染si-NC,LPS+miR-136-3p组转染miR-136-3p,LPS+miR-NC组转染miR-NC,LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组转染si-LINC00472、anti-miR-136-3p,LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组转染si-LINC00472、anti-miR-NC，转染6 h后给予1μg/mL LPS刺激24 h。LPS组不予转染，仅给予1μg/mL LPS刺激24 h。对照组常规培养，不予转染和LPS刺激。收集各组干预后细胞，采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00472、miR-136-3p表达，采用MTT法检测再培养48 h细胞增殖活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用ELISA法检测培养上清液IL-6、IL-8，采用Western blotting法检测程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达。通过LncBase Predicted v. 2在线预测网站、starBase数据库预测lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的结合位点，并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的靶向调控关系。结果 LPS组lncRNA LINC00472相对表达量明显高于对照组，miR-136-3p相对表达量明显低于对照组，细胞增殖活性亦明显低于对照组，而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显高于对照组（P均<0.05）。LPS+si-LINC00472组lncRNA LINC00472相对表达量明显低于LPS+si-NC组，miR-136-3p相对表达量明显高于LPS+si-NC组，细胞增殖活性亦明显高于LPS+si-NC组，而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显低于对照组（P均<0.05）。LPS+miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显高于LPS+miR-NC组，而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显低于LPS+miR-NC组（P均<0.05）。LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组，而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组（P均<0.05）。经LncBase Predicted v. 2在线预测网站和starBase数据库预测并经双荧光素酶报告基因实验验证，lncRNA LINC00472与miR-136-3p存在靶向结合位点，miR-136-3p与PDCD4存在靶向结合位点。结论 沉默lncRNA LINC00472可通过促进miR-136-3p表达、抑制PDCD4表达，减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

• 出版日期2022
• 单位上海中医药大学附属曙光医院; 江西中医药大学