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摘要
本研究建立了检测牛副流感病毒3型的SYBR Green Ⅰ Q-PCR方法。根据Gen Bank发表的BPIV3序列进行对比分析,选取P基因上保守区域设计特异性引物。优化反应体系,建立Q-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果显示,构建的标准曲线在104108copies.μL-1内具有较好的线性关系,相关系数达到0.998,斜率为-3.370,Q-PCR扩增效率为98%。特异性试验中,利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测为阳性,对牛疱疹病毒I型、牛病毒性腹泻病毒进行检测,结果呈阴性。敏感性试验中,该方法对标准品的最小检出量为1.0×103 copies.μL-1。重复性试验中,Ct值变异系数均小于1.0%。表明SYBR Green Ⅰ Q-PCR法能够快速地对病原进行诊断,该方法具有较强的特异性、良好的敏感性及重复性,为实验室诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法。
- 出版日期2017
- 单位动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学
