大黄鱼微卫星标记的富集与筛选

作者：郝君; 孙效文; 梁利群; 鲁翠云

来源：中国水产科学, 2006, (05): 762-766.

• 大黄鱼
• 微卫星
• 磁珠
• 生物素 large yellow croaker
• microsatellite
• magnetic beads
• biotin

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,采用生物素-磁珠富集微卫星,与传统放射性同位素杂交法相结合,构建筛选大黄鱼的微卫星文库。用生物素-微卫星捕捉单链限制性酶切片段(含有接头和大黄鱼微卫星序列),经PCR扩增单链目的片段形成双链,然后连接至T载体上,转化感受态细胞。将移至硝酸纤维素膜的重组菌用32P标记的放射性同位素探针5′-[γ-32PATP(CA)15筛选出阳性克隆菌。测序结果发现,阳性克隆率为71.9%,105个微卫星位点。其中选取设计合成30对并筛选出22对可用引物。说明所建大黄鱼微卫星文库是一个高质量的文库,可为大黄鱼基因组结构分析、大黄鱼精密微卫星连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究、...

• 出版日期2006
• 单位大连海洋大学; 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所