阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

作者：胡子有; 漆松涛; 张遐; 颜晓慧; 吴炳义

来源：解放军医学杂志, 2009, 34(12): 1442-1444.

• 受体,阿片样,δ
• 绿色荧光蛋白质类
• CHO细胞

目的构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达。结果测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光。应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。

• 出版日期2009
• 单位南方医科大学南方医院