大骨鸡HSP70蛋白的表达、纯化及质量检测

作者：赵颂; 杨卉新; 朱弘焱; 陶晓莉; 苏玉虹; 田玉民

来源：畜牧与兽医, 2017, 49(01): 45-50.

• 大骨鸡
• HSP70
• 克隆表达
• 蛋白纯化

旨在构建鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达质粒p ColdⅡ-HSP70,诱导表达、纯化后检测HSP70蛋白的质量。将目的基因扩增后克隆至表达载体p Cold II,构建重组载体p ColdⅡ-HSP70,在2种大肠杆菌菌株(BL21(DE3)和Rosetta(DE3)p Lys S中经IPTG在不同温度与不同浓度条件下诱导表达并纯化。经SEC-FPLC和HPLC进行纯度鉴定,采用鲎试剂检测蛋白内毒素含量(将HSP70蛋白按1 200、600、120倍稀释);Western blot及质谱方法检测蛋白分子量。结果显示:酶切和测序结果均证实HSP70表达载体构建正确,可诱导表达。经IPTG诱导表达后确定BL21(DE3)在37℃条件下表达蛋白效果最佳,经检测HSP70蛋白的相对分子质量为71 988.04,蛋白纯度大于90%,内毒素小于500 Eu/mg。结果表明:成功构建了大骨鸡HSP70基因的表达载体,获得了纯化的HSP70蛋白,为进一步研究HSP70在热应激中的作用机制提供了基础。

• 出版日期2017
• 单位锦州医科大学; 生命科学研究院