单增李斯特菌多克隆抗体制备及在乳胶凝集试验中的应用

作者：鞠文宋秀玲原野张士尧方珍徐坤李娟孟日增

来源：吉林大学学报(医学版), 2012, (05).

• 单增李斯特菌
• 多克隆抗体
• 乳胶凝集试验

目的: 制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(L M) 多克隆抗体, 并初步探讨其在乳胶凝集试验(L AT )中的应用。方法: 复苏并扩大培养 L M 标准菌株, 制备灭活疫苗免疫家兔, 采用 ELI S A 法测定耳缘静脉血抗体效价。4 次免疫后, 颈动脉采血分离血清, 采用辛酸- 饱和硫酸铵法粗分离, 经蛋白亲和层析柱 Hi Trap Pr ot ei n GHP 进行I g G 纯化, 借助 SDS- P AGE 电泳、紫外分光光度法、间接 ELI S A 法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯I g G 与乳胶微球进行共价偶联, 并合理选择偶联乳胶的I g G 含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中 L M 的方法。结果: 制备并纯化的兔抗 L M I g G 蛋白浓度为23. 364 g · L ? 1 , 效价为1: 12 800 ～1 : 25 600 , 与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应, 与斯氏李斯特菌有弱交叉反应;致敏时I g G 与乳胶微球偶联比率为1 : 40 ; 利用 L AT 方法检测246 份样品, 阳性检出率为87. 5 % , 最低检出抗原含量为0. 039 8 g · L ? 1 。结论: 制备了高效价高纯 度 的 兔 抗 L M 多 克 隆 抗 体, 且 建 立 的 L AT 方 法 特 异 性 强,敏感性较高, 重复性好, 便于基层推广使用, 为 L M 的现场检测提供了一种新手段。

• 出版日期2012
• 单位吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 吉林大学