大肠杆菌重组几丁质酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究

作者：吕梦圆; 吕永玲; 夏祥; 林建国; 王常高; 蔡俊; 胡瑛

来源：食品工业科技, 2015, (22): 168-172+178.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2015.22.027

• 几丁质酶
• 重组蛋白
• 包涵体
• 复性 chitinase
• recombinant protein
• inclusion body
• refold

通过研究重组几丁质酶在大肠杆菌表达系统中诱导表达的浓度、时间和温度,获得表达的最佳条件。表达产物除了可溶性目的蛋白以外,仍存在于包涵体中。采用透析复性和Ni-NTA亲和层析柱上复性两种方法对包涵体中的目的蛋白进行复性,并比较对目的蛋白产率和比酶活的影响。并考察了亲和层析柱上复性时的上样量、洗脱速率和温度对酶活的影响。结果发现,表达的几丁质酶可以采用透析和亲和层析柱上复性,亲和层析柱上复性的比酶活为1347.7 U/mg,明显高于透析复性,但产率明显低于透析复性。对1 m L的Ni-NTA亲和层析柱,较低浓度的蛋白复性液在0.4 m L·min-1洗脱速率下,降低上样量和温度,可以提高复性效率。...

• 出版日期2015
• 单位湖北工业大学