枸杞多糖对2,4-二氯苯氧乙酸诱导的PC12细胞凋亡蛋白的影响

作者：周健; 柴茹; 张亚娟; 李宏辉; 贾磊娜; 王凯; 朱玲勤; 杨惠芳^*

来源：环境与健康杂志, 2020, 37(07): 605-659.

DOI：10.16241/j.cnki.1001-5914.2020.07.009

• 枸杞多糖
• 2,4-二氯苯氧乙酸
• PC12细胞
• Bax
• Bcl-2
• caspase-3

目的观察枸杞多糖(LBP)对2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)诱导的PC12细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨2,4-D诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法培养PC12细胞,测定细胞生长曲线。分别设对照(无血清培养基)组和400、800、1 200μmol/L 2,4-D染毒组及LBP干预组(250 mg/L LBP+1 200μmol/L 2,4-D),以CCK-8法检测细胞在不同染毒浓度下的活性变化,以Hochest染色定性分析细胞凋亡情况,以JC-1法测定线粒体膜电位变化,以透射电镜观察染毒后PC12细胞形态变化,以Western blot法检测PC12细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3的表达。结果细胞在24～48 h进入对数增长期,边界清晰,胞质透明。与对照组比较,各浓度2,4-D染毒组PC12细胞存活率均降低,ROS含量及凋亡率均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且随着2,4-D染毒浓度的升高,PC12细胞存活率呈下降趋势,ROS含量及凋亡率均呈上升趋势。与1 200μmol/L 2,4-D染毒组比较,LBP干预组PC12细胞存活率较高,ROS含量及凋亡率均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,各浓度2,4-D染毒组PC12细胞线粒体膜电位均降低,差异有统计学意义(P<0.05),且随着2,4-D染毒浓度的升高,PC12细胞线粒体膜电位呈下降趋势;LBP干预组PC12细胞线粒体膜电位水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经倒置荧光显微镜观察,染毒组细胞固缩变圆,突触消失。与对照组比较,各浓度2,4-D染毒组PC12细胞Bax、caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下降,Bcl-2/Bax比值下降,差异有统计学意义(P<0.05);LBP干预组PC12细胞Bax、caspase-3蛋白表达量下降,Bcl-2蛋白表达量增加,Bcl-2/Bax比值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经透射电镜观察,染毒后400μmol/L 2,4-D组线粒体肿胀,形状不规则呈空泡状,溶酶体被激活;800μmol/L 2,4-D组细胞核膜皱缩,线粒体消失;1 200μmol/L 2,4-D组细胞固缩,核膜溶解,可见凋亡小体;LBP干预组细胞膜较完整,轮廓较清晰。结论 2,4-D可能通过调节线粒体ROS诱导PC12细胞凋亡,引起PC12细胞Bax、caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达量下降,而LBP具有一定的改善作用。

• 出版日期2020
• 单位宁夏医科大学