过表达TRPM7蛋白对HEK293细胞氧糖剥夺再氧合损伤后NF-κB活化的影响

作者：张静; 王喜丰; 李刚; 王岚; 沈伟

来源：华中科技大学学报(医学版), 2017, 46(02): 117-121.

• TRPM7
• Toll样受体4
• HEK293细胞
• 氧糖剥夺再氧合
• NF-κB活化

目的探讨过表达瞬时受体电位通道M7(transient receptor potential melastatin type 7channel,TRPM7)蛋白对人胚肾293细胞(human embryonic kidney 293cells,HEK293)氧糖剥夺再氧合(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤后细胞核内核转录因子kappa B(nuclear factorκB,NF-κB)表达水平的影响,并研究上述变化是否通过Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)蛋白介导。方法运用重组DNA技术建立四环素调控稳定性表达TRPM7的HEK293细胞系(293-TRPM7/WT):加入四环素诱导稳定表达TRPM7的293-TRPM7/WT细胞称为Tet(+)细胞,未加入四环素的293-TRPM7/WT细胞称为Tet(-)细胞。通过免疫印迹技术鉴定上述细胞,予以氧糖剥夺1h/再氧合24h处理后,运用免疫印迹技术检测细胞核内NF-κB p65蛋白和TLR4蛋白的表达;在Tet(+)细胞OGD处理前1h加入TLR4特异性抑制剂TAK242或同体积二甲基亚砜(DMSO),使用免疫印迹技术检测细胞核内NF-κB p65蛋白表达的变化。结果 (1)Tet(-)细胞在经过OGD/R处理后,细胞核内NF-κB的表达增加(P<0.05),而Tet(+)细胞在OGD/R后核内NF-κB的表达量与经过同样处理的Tet(-)细胞相比增加更为显著(P<0.05);(2)Tet(-)细胞在OGD/R损伤后细胞内TLR4的表达升高(P<0.05),与之相比,Tet(+)细胞在OGD/R处理后TLR4的表达量则更为升高(P<0.05);(3)Tet(+)细胞经过OGD/R处理,并加入TLR4特异性抑制剂TAK242后,与未加药组或DMSO组相比,细胞核内NF-κB蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论过表达TRPM7增加OGD/R后293-TRPM7/WT细胞内TLR4蛋白的表达,并通过TLR4介导加速OGD/R后NF-κB的活化。

• 出版日期2017
• 单位神经内科; 华中科技大学同济医学院附属普爱医院