摘要

利用正交试验设计方法,对影响华扁穗草ISSR-PCR反应中Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板等5个因素进行优化筛选,以期建立最佳反应条件。同时,筛选扩增条带清晰稳定的ISSR引物,经退火温度试验得到各个引物的最佳退火温度。结果表明:华扁穗草20μl ISSR-PCR最佳反应体系包括1.80 mmol/L Mg2+、0.80U Taq DNA聚合酶、0.100mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物和20ng DNA模板;筛选出扩增条带清晰稳定的10条引物。体系验证和引物筛选试验表明,其在华扁穗草不同个体中能够扩增出条带清晰、稳定性好的条带,可用于后续华扁穗草遗传多...