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摘要
T细胞受体(T cell receptor,TCR)是通过二硫键连接α链和β链或者γ链和δ链的异二聚体蛋白复合物。本研究使用原核系统体外分别表达两条单链,摸索并确定快速获得一定量的TCR蛋白的复性条件,实验发现TRA、TRB蛋白变性液按照2:1 (mg/mg)的比例混合均匀后缓慢滴加到4 ℃搅拌的复性液(50 mmol/L Tris、0.4 mol/L L-精氨酸、5 mol/L脲、5 mmol/L EDTA、10 mmol/L还原型谷胱甘肽、2 mmol/L氧化型谷胱甘肽,pH=7.6)中复性24 h,使用HitrapTMCaptoTM Q初步分离纯化,去除部分不溶性及等电点相差较大的杂质蛋白,SuperdexTM 75Increase 10/300 GL进一步精细分离获得纯度在90%以上的TCR复合物蛋白。实验通过还原型和非还原型电泳及Western blot对纯化后的TCR蛋白进行分子量及空间结构鉴定,证明了 TCR二聚体的原核表达与纯化的技术可行性。该研究为后续快速获得高纯度且正确折叠的TCR蛋白、进一步研究其功能和结构打下了夯实的基础。
