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摘要
本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体进行比较鉴定,并采用细胞毒性试验对试剂盒法提取的外泌体进行细胞毒性评估。结果显示:2种提取方法均获得了茶托样结构的囊泡,但TEM视野下试剂盒法提取的外泌体较差速超速离心法多。试剂盒法提取的外泌体蛋白浓度显著高于差速超速离心法(P<0.05)。2种提取方法均能够检测到外泌体的标志性蛋白凋亡连接基因2相互作用蛋白X(ALIX)和四次跨膜蛋白(CD81);差速超速离心法提取的外泌体CD81蛋白丰度极低,且并未鉴定出标志性蛋白肿瘤敏感基因101蛋白(TSG101),但试剂盒法检测到了TSG101。2种提取方法得到的外泌体粒径分布均符合外泌体的正常粒径大小(30～150 nm)。进一步通过细胞毒性试验发现,试剂盒法提取的外泌体对细胞的增殖分化几乎没有影响。因此,基于本试验条件下,试剂盒法更适用于提取娟姗牛乳源性外泌体。
- 出版日期2020
- 单位中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 动物营养学国家重点实验室
