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摘要
目的制备德国小蠊(Blattella germanica)变应原Bla g 2的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法以纯化的0.2 mg/ml Bla g 2蛋白溶液为抗原免疫雌性BLAB/c小鼠6只,免疫4次,每次间隔1周。免疫后第5天取小鼠尾静脉血,制备小鼠血清,第6天加强免疫1次,第7天处死小鼠取脾脏,制备脾细胞悬液。测定小鼠抗血清滴度,运用杂交瘤技术将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法对阳性孔杂交瘤细胞进行克隆化。蛋白质印迹(Western blotting)检测单克隆抗体特异性,间接ELISA测定单克隆抗体效价,双抗夹心ELISA鉴定单克隆抗体的亚型。结果在小鼠血清稀释至1∶16 000时A450值仍>0.100,判断为免疫成功。通过杂交瘤技术获得2株能稳定分泌Bla g 2单克隆抗体的杂交瘤细胞,标记为Bla g 2-1、Bla g 2-2。Western blotting结果表明,Bla g 2-1和Bla g 2-2单克隆抗体对Bla g 2蛋白均具有高度特异性。间接ELISA测得2株单克隆抗体的效价分别为Bla g 2-1(1∶16 000)、Bla g 2-2(1∶8 000)。双抗夹心ELISA结果表明单克隆抗体蛋白亚类均为免疫球蛋白G1(IgG1)。结论制备的德国小蠊变应原单克隆抗体Bla g 2能与Bla g 2蛋白发生特异性结合。
- 出版日期2017
- 单位舟山医院; 锦州医科大学; 南京医科大学第一附属医院
