牛凝乳酶原基因在毕赤酵母中的表达及其酶学特性的研究

作者：杨艺; 普燕; 张富春

来源：食品工业科技, 2014, (15): 188-192.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2014.15.032

• 牛凝乳酶
• 毕赤酵母
• 分泌表达
• 酶学特性
• 金属离子 bovine chymosin
• Pichia pastoris
• secretory expression
• enzymatic properties
• metal ions

凝乳酶是制造干酪的关键酶。为获得高活性的牛凝乳酶(chymosin,B-chy),用电脉冲法将线性化的pGAPZαA-B-pchy重组表达载体转化到毕赤酵母GS115中。该菌株在以葡萄糖为碳源的YPD培养基中可分泌表达牛凝乳酶原。SDS-PAGE分析表明所表达的牛凝乳酶,分子量约为37ku,符合预期大小。发酵培养96h后,酶活力达到96SU/mL。酶学特性分析表明,其最适凝乳温度为60℃,在pH2~6、小于50℃的温度范围内稳定。Ca2+浓度为40mmol/L时,钙促酶反应活性达到最高,此后随着Ca2+浓度的增加酶活力逐渐降低。金属离子Al3+、Mn2+、Fe2+、Mg2+和K+对酶活力具有显...

• 出版日期2014
• 单位新疆大学