桉树ISSR-PCR反应体系的建立及优化

作者：曾艳玲; 谢鹏; 谢耀坚; 谭晓风

来源：中南林业科技大学学报, 2008, (01): 44-48.

• 分子生物学
• 桉树
• 叶片基因组DNA
• ISSR-PCR
• 优化 molecular biology
• Eucalyptus
• leaves genomic DNA
• optimization

模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度,Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增(ISSR-PCR)结果的主要因素.以桉树叶片基因组DNA为试材,系统地测试了这6个因素对桉树ISSR反应结果的影响.结果表明:最优化的反应体系即20μL反应体系中,含20 ng模板DNA、0.4μmol.L-1随机引物、0.15 mmol.L-1dNTPs、2.0 mmol.L-1Mg2+、1.25 U TaqDNA聚合酶.最佳退火温度为55℃;PCR反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性45 s,55℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃再延伸7 min...

• 出版日期2008
• 单位中南林业科技大学; 国家林业局桉树研究开发中心