千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬降解的影响

作者：邓琴; 傅若秋; 高宁

来源：第三军医大学学报, 2017, 39(24): 2352-2358.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201709083

• 千金藤素
• MDA-MB-231
• 自噬
• 溶酶体

目的探讨千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的影响及其机制。方法激光共聚焦显微镜观察千金藤素对转染了EGFP-LC3、tf LC3(m RFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62以及Beclin1的表达水平。激光共聚焦显微镜观察千金藤素、Bafilomycin A1、Rapamycin分别对转染了EGFP-LC3、tf LC3(m RFP-EGFPLC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2的表达。结果千金藤素处理后细胞中的自噬体(EGFP-LC3荧光团)数量明显多于对照组[(30.40±6.42)vs(5.00±2.12),P<0.01],自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达也呈量效和时效增多。转染tf LC3质粒后,千金藤素组和Bafilomycin A1组红绿荧光重叠呈现较多的黄色荧光团,而Rapamycin组出现较多的红色荧光团。千金藤素联用Bafilomycin A1并未进一步升高p62和LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,但联用Rapamycin明显升高了LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,同时,逆转了Rapamycin导致的p62蛋白表达水平减少。千金藤素既不影响对溶酶体的染色,也不减少LAMP1、LAMP2蛋白的表达水平,但影响了m RFP-LC3和m GFP-LAMP1的共定位。结论千金藤素通过阻断自噬体与溶酶体的融合抑制MDA-MB-231细胞自噬体降解。

• 出版日期2017
• 单位第三军医大学