人参thionins的克隆、原核表达和活性研究

作者：张鹏飞; 边帅; 赵月; 赵雨; 王佳雯^*

来源：生物技术通报, 2019, 35(02): 53-57.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0702

• 人参
• 硫堇
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 抑真菌活性

抗菌肽在人参的生长过程中发挥了抑菌抗逆等重要作用。通过研究人参硫堇蛋白(Thionins)的抗菌活性,为未来进行大规模生产和生物农药研究奠定基础。分析人参thionins序列,构建原核表达质粒,诱导蛋白表达,对包涵体进行亲和纯化,使用纸片扩散法和质膜通透性实验检测纯化蛋白的抗菌活性。人参thionins长度为228 bp,编码75个氨基酸,选取其成熟肽区域(29-75 aa)进行后续的表达和纯化。成功构建了原核表达质粒pGEX-4T1-thionins,在大肠杆菌BL21中获得目的蛋白的高效表达,通过包涵体纯化获得目的蛋白,并进行复性和浓缩。人参硫堇蛋白在3和9μmol/L的浓度下,对黑斑病菌丝的生长抑制率分别为36.0%和51.1%,对黑斑孢子的半数抑制浓度为0.87μmol/L。人参硫堇蛋白具有显著抑制人参黑斑病真菌的活性的作用。

• 出版日期2019
• 单位长春中医药大学