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摘要
[目的]以狭叶柴胡愈伤组织为材料,旨在筛选出适合愈伤组织原生质体制备及纯化的最优条件。[方法]研究了酶的种类及浓度、稳渗剂种类、酶解时间及蔗糖分离液浓度等因素对狭叶柴胡愈伤组织原生质体制备和纯化的影响。[结果]最佳适宜条件为:2%纤维素酶+1%离析酶,0.6mol·L-1甘露醇为稳渗剂,27℃避光预裂解2h后酶解4h。在最优条件下,原生质体产量可达1.26×106个·g-1。在上述条件不变情况下,用21%蔗糖溶液进行提纯,得到的原生质体纯化结果较好,纯化后原生质体产量可达0.75×106个·g-1。[结论]该研究结果为进一步利用原生质体进行狭叶柴胡基因工程工作奠定了技术基础。
