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摘要
目的观察新型偶氮鎓二醇盐衍生物即O2-(2,4-二硝基苯基)1-〔(4-乙氧羰基)哌嗪-1-yl〕偶氮-1-鎓-1,2-二醇(JS-K)体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用,并初步探究诱导细胞凋亡及作用机制。方法 JS-K(0,0.725,1.5,3.125,6.25,12.5和25μmol·L-1)分别作用于SMMC-7721细胞24,48和72 h,用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测JS-K对细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察JS-K(2.5,5和10μmol·L-1)作用24 h后细胞形态变化;DAPI染色观察细胞凋亡形态学改变;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;NO荧光探针(DAF-FM DA)进一步检测细胞中NO水平;Western蛋白印迹检测Bcl-2、Bax、活化的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,JS-K 1.525μmol·L-1能显著抑制细胞增殖(P<0.01),呈一定的剂量和时间依赖性,24,48和72 h的IC50值分别为5.1,4.0和3.1μmol·L-1。LDH释放量随JS-K浓度升高而明显增加;倒置显微镜下给药组细胞形态变圆,胞膜皱缩,体积变小等;细胞呈现出染色质固缩、蓝色荧光加深等凋亡形态;AnnexinⅤ/PI双染显示:JS-K(2.5,5和10μmol·L-1)和阳性药5-Fu作用细胞24 h,凋亡率分别为(19.1±0.07)%,(40.8±0.03)%,(75.5±0.12)%和(56.7±0.07)%,均高于空白对照组(P<0.01)。对照组(NO水平为100%)相比,JS-K浓度增加细胞内NO水平呈上升趋势(P<0.01),且加入NO清除剂(carboxy-PTIO)后JS-K的作用明显降低;抗凋亡蛋白Bcl-2的表达减少,促凋亡蛋白Bax增强,Bax/Bcl-2比值升高,胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3活化形式增加。结论 NO供体JS-K可通过诱导细胞凋亡显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导凋亡机制很有可能与调节Bcl-2,Bax,胱天蛋白酶9及胱天蛋白酶3凋亡相关蛋白表达有关。
- 出版日期2016
- 单位河南科技大学
