抗滑液支原体FolD单链抗体的制备及活性鉴定

作者：何肖肖; 张立; 马海云; 赵云海; 王青; 岳亚辉; 邢小勇; 武小椿; 权国梅; 包世俊^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230307.001

• 滑液支原体
• 单链抗体
• 原核表达
• 活性鉴定

旨在制备抗滑液支原体(MS)FolD的小分子单链抗体(ScFv)，并对其活性进行鉴定。本研究从分泌抗FolD单克隆抗体杂交瘤细胞中提取总RNA，利用鼠源抗体前导肽和恒定区的通用引物，通过RT-PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并利用短肽(Gly4Ser)3连接形成VH-linker-VL，将其插入到表达载体pBAD18-Cm中，转化至E.coli BL21(DE3)，经0.15%阿拉伯糖于16℃条件下诱导表达，并利用SDS-PAGE和Western blot分析表达结果，进而利用Western blot和间接ELISA检测ScFv的活性。结果显示，FolD单克隆抗体VH和VL基因大小分别为357 bp和333 bp，应用Linker拼接形成的VH-linker-VL基因大小为753 bp。SDS-PAGE和Western blot结果显示，ScFv在E.coli中以可溶性形式表达，其相对分子质量约为31 ku。Western blot和ELISA检测结果表明ScFv与抗原FolD有较好的结合活性。本研究成功获得了抗MS FolD的ScFv，为进一步优化ScFv的活性奠定了基础，也为后续研究MS快速检测方法提供生物学材料。

• 出版日期2023
• 单位甘肃农业大学