慢病毒介导siRNA沉默EGFR基因及其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

作者：法镇中; 江勇; 谭玉林; 吴宝强; 石亮荣

来源：中华肝脏外科手术学电子杂志, 2013, 2(02): 113-118.

• 癌,胰腺管
• 受体,表皮生长因子
• 慢病毒
• 小干扰核糖核酸
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞周期

目的探讨利用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默表皮生长因子受体(EGFR)基因的可行性及其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建慢病毒表达载体LV-shEGFR,包装慢病毒表达载体及制备慢病毒颗粒EGFR-shRNA。实验分为Panc-1组(空白组)、绿色荧光蛋白(GFP)-Panc-1组(对照组)及siEGFR-Panc-1组(干扰组)共3组。空白组使用未经处理的对数生长期的胰腺癌细胞株Panc-1细胞,对照组使用不含siRNA片段的慢病毒颗粒及干扰组使用制备好的EGFR-shRNA慢病毒颗粒感染对数生长期的Panc-1细胞。采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测EGFR基因表达量(以与β-肌动蛋白相对浓度比值表示),采用蛋白质印迹法(Western-blot)检测细胞中EGFR蛋白表达(以灰度值表示),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。3组EGFR表达、吸光度(A)值、细胞凋亡率、细胞周期比较采用单因素方差分析和t检验。结果干扰组EGFR基因相对含量为0.20±0.04,明显低于对照组(1.00±0.15)及空白组(1.13±0.13),差异有统计学意义(LSD-t=7.865,7.668;P<0.05)。干扰组EGFR蛋白表达量为0.185±0.009,与对照组(0.801±0.087)及空白组(0.825±0.092)相比,干扰组EGFR蛋白表达明显降低(LSD-t=4.216,3.975;P<0.05)。干扰组细胞增殖受抑制,生长速度较对照组生长缓慢。干扰组G2/M期细胞比率为(8.87±0.29)%,与空白组(20.00±1.88)%和对照组(21.48±2.13)%比较明显减少,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.015,2.323;P<0.05),干扰组S期细胞比率为(50.97±3.04)%,与空白组(36.67±6.18)%和对照组(39.91±2.09)%比较明显增加,比较差异有统计学意义(LSD-t=1.987,2.251;P<0.05)。干扰组细胞凋亡率为(18.4±2.3)%明显高于对照组(7.4±1.4)%和空白组(7.7±1.2)%,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.585,2.667;P<0.05)。结论慢病毒介导siRNA可以沉默EGFR基因,抑制胰腺癌细胞增殖,阻滞细胞在S期和促进细胞凋亡。

• 出版日期2013
• 单位苏州大学附属第三医院