慢病毒介导的mTOR敲低肝癌细胞株HepG2的构建及初步功能检测

作者：刘家宏; 徐小洁; 符静; 范忠义; 吕朝晖; 陆菊明; 肖文华; 朱建华; 叶棋浓

来源：生物技术通讯, 2013, (04): 467-470.

• 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
• RNA干扰
• 慢病毒 mammalian target of rapamycin
• RNA interference
• lentivirus

目的:建立高效稳定的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,并对mTOR敲低的HepG2肝癌细胞株的功能进行初步检测。方法:构建了2条不同的人mTOR慢病毒siRNA载体pLenti-H1/mTOR siRNA,与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染HepG2细胞;经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹,检测mTOR敲减效果及其下游基因c-myc、周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平及4E-BP1、S6K1磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的pLenti-H1/mTOR siRNA能有效抑制m...

• 出版日期2013
• 单位中国人民解放军总医院; 中国人民解放军军事医学科学院