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摘要
目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ0A549细胞系。方法:在含50 ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35 d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ0A549细胞系;采用MTT法测定ρ0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ+A549细胞为多角形,ρ0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35 d的ρ0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ+A549细胞相比,ρ0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。
