重组人白介素21的原核表达与体外活性研究的优化

作者：王彤; 张娟; 厉道娟; 罗晨; 吴沁航; 高美风; 王旻

来源：药物生物技术, 2013, (04): 283-287.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.2013.04.001

• 重组人白介素21
• Overlap-PCR
• 原核表达
• 亲和层析
• 复性
• 细胞增殖抑制 Recombinant human interleukin 21
• Overlap-PCR
• Prokaryotic expression
• Affinity chromatography
• Renaturation
• Cell prolifation inhibition

为了构建重组人白介素21(rhIL-21)原核稳定表达和体外活性检测系统,采用Overlap-PCR法合成目的基因;经双酶切整合至pET28,化学转化法转入大肠杆菌BL21(DE3)构建pET-28a-rhIL-21 BL21(DE3)原核表达系统;胞内表达的包涵体经镍亲和层析色谱柱纯化后,尿素缓冲液梯度透析复性,最终溶于PBS缓冲液;双抗体夹心法ELISA、Western blotting检测复性蛋白的生物活性;细胞增殖抑制试验(MTT法)研究rhIL-21对Jurkat细胞株和HuT102细胞株的作用。实验成功建立了rhIL-21表达纯化与活性评价体系,为进一步研究IL-21的促免疫性疾病...

• 出版日期2013
• 单位中国药科大学