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摘要
目的:探讨环状RNA(circRNA)YAP1对激素性股骨头坏死(SONFH)大鼠股骨头微血管内皮细胞(MVECs)血管生成的作用与机制。方法:成年雄性SD大鼠接受甲基强的松龙(MPS,20mg·kg-1·d-1肌肉注射3周，以诱导SONFH模型(n=30只)。Ctrl组(n=30只)注射等量生理盐水。用micro-CT扫描和HE染色评估是否造模成功。分离大鼠的股骨头MVECs。并用CD31蛋白作为标志物用免疫荧光化学法(IF)鉴定股骨头MVECs。将MVECs分为过表达circRNA YAP1组(pcDNA-YAP1组)、阴性对照组(pcDNA-NC组)、以及pcDNA-YAP1联合Wnt1/β-catenin通路拮抗剂dickkopf-1处理组(pcDNA-YAP1+dickkopf-1组)。用qPCR检测circRNA YAP1表达，Western blot法分别检测Wnt1、β-catenin、VEGF-A和vimentin的表达。用CCK-8实验检测各组细胞的增殖活性。Transwell小室检测细胞的迁移率。管形成实验检测细胞的血管生成能力。结果:HE染色结果显示Ctrl组表现为健康状态，无骨坏死，SONFH组大鼠均重度股骨头坏死，股骨头恶化。micro-CT扫描的结果显示Ctrl组表现骨小梁致密规则，骨小梁数量和形态均正常，SONFH组伴空骨陷窝，骨小梁减少，骨小梁缩短。与Ctrl组(1.00±0.08;1.00±0.12;1.00±0.15)比较，SONFH组股骨组织中circRNA YAP1(0.27±0.04)、Wnt1(0.49±0.03)、β-catenin(0.33±0.03)表达量均显著减少(t=12.158,P=0.009;t=10.596,P=0.012;t=10.080,P=0.014)。另外，成功分离Ctrl组和SONFH组的股骨头MVECs。与Ctrl组(1.00±0.00;1.00±0.02;1.00±0.01)比，SONFH组股骨头MVECs中circRNA YAP1(0.15±0.01)、Wnt1(0.28±0.05)、β-catenin(0.31±0.02)表达量都显著减少(t=17.625,P=0.004;t=16.154,P=0.005;t=13.596,P=0.007)。在MVECs中，与pcDNA-NC组比，pcDNA-YAP1组的circRNA YAP1、Wnt1、β-catenin、VEGF-A和vimentin的表达均上调，细胞增殖率、细胞迁移以及小管形成率都明显增加(均P<0.05)。与pcDNA-YAP1组比，pcDNA-YAP1+dickkopf-1组的circRNA YAP1表达变化无统计学意义(P>0.05),而Wnt1、β-catenin、VEGF-A和vimentin的表达均下调，细胞增殖率、细胞迁移、以及小管形成率都明显被抑制(均P<0.05)。结论:CircRNA YAP1通过激活Wnt1/β-catenin通路促进SONFH大鼠的骨血管内皮细胞的血管生成。
- 出版日期2023
- 单位新疆医科大学第五附属医院
