猪弓形虫循环抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

作者：寇金华; 杨正涛; 刘维建; 高珺珊; 李建华; 张西臣; 宫鹏涛

来源：中国生物制品学杂志, 2018, 31(01): 62-66.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002056

• 弓形虫
• 循环抗原
• 表面抗原
• 双抗体夹心ELISA

目的建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法。方法利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶4001∶6 400倍比稀释)、检测抗体(1∶4001∶12 800倍比稀释)、血清稀释度(1∶101∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5%脱脂奶粉、10%胎牛血清、5%BSA、1%BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性。采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测。结果双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3 200,封闭液为1%BSA,血清稀释度为1∶80。该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均<11%。广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2%(19/94)和11.7%(11/94)。结论该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测。

• 出版日期2018
• 单位吉林大学