抗非洲猪瘟病毒NP419L蛋白纳米抗体的筛选鉴定及其在抗体检测中的初步应用

作者：王映; 朱家宏; 赵加凯; 纪品品; 陈旭; 张路; 刘宝元; 孙亚妮^*; 赵钦^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(06): 2509-2520.

• 非洲猪瘟病毒
• NP419L蛋白
• 纳米抗体

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是猪的一种高度传染性疾病，严重威胁全球养猪业的发展。本研究旨在筛选抗非洲猪瘟病毒(ASF virus, ASFV)NP419L蛋白的纳米抗体并对其在ASF抗体检测中的应用进行初步评价。大肠杆菌表达和Ni-NTA亲和层析纯化等技术表达纯化重组NP419L蛋白；将纯化的重组蛋白免疫双峰驼，5次免疫采集外周血淋巴细胞提取总RNA,经反转录、巢式PCR、酶切、连接和电转化等构建抗NP419L蛋白的噬菌体展示文库；利用噬菌体展示筛淘技术，经三轮筛淘获得抗NP419L蛋白的纳米抗体；构建纳米抗体与辣根过氧化物酶(HRP)融合蛋白的真核表达载体，转染HEK293T细胞，ELISA和间接免疫荧光(IFA)等鉴定融合蛋白的分泌表达及其与NP419L蛋白的结合；竞争ELISA初步评价获得的纳米抗体与HRP融合蛋白在ASF抗体检测中的应用。结果显示，成功制备了纯度较高的预期大小为48 ku的重组NP419L蛋白；构建获得了阳性率为89.5%,库容量为6×108的噬菌体展示文库；筛淘获得了6株抗NP419L蛋白的纳米抗体；分泌表达了该6株纳米抗体与HRP的融合蛋白，ELISA检测发现该6株融合蛋白可特异性结合重组NP419L蛋白，IFA检测发现1株融合蛋白与真核表达的NP419L蛋白结合，该融合蛋白可作为探针应用于ASF抗体的检测。本研究成功筛选出6株抗ASFV NP419L蛋白的特异性纳米抗体，并对其进行了结合蛋白特性的鉴定和抗体检测初步应用的评价，为后续ASF诊断技术的研发和NP419L蛋白功能研究奠定了基础。

• 出版日期2023
• 单位西北农林科技大学