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摘要
目的:构建人程序性死亡蛋白1配体(PD-L1)稳定过表达的慢病毒载体，建立过表达PD-L1的Ishikawa稳转株，为研究PD-L1介导的生物学功能在子宫内膜癌中的作用提供细胞模型。方法:提取Ishikawa细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1 CDS区序列，将其重组至含FLAG标签和嘌呤霉素抗性的pCDH载体上。测序鉴定后，使用第二代慢病毒包装体系共转染293T细胞，获取病毒并感染Ishikawa细胞，嘌呤霉素持续筛选获得稳转株，RT-qPCR和Western blot检测目的基因表达。结果:成功将PD-L1 CDS区序列重组至pCDH质粒载体上；经慢病毒包装、感染Ishikawa细胞后，PD-L1 mRNA和蛋白表达水平均显著上调。结论:本研究成功构建了PD-L1过表达慢病毒载体，并建立了过表达PD-L1基因的Ishikawa稳转株，为研究PD-L1在子宫内膜癌中的作用提供了细胞模型。
- 出版日期2023
- 单位浙江大学医学院附属妇产科医院; 中心实验室
