干扰乳酸脱氢酶A表达对肝癌HepG2细胞增殖与迁移的影响

作者：司素华; 熊二梦; 杜凤仪; 彭琬昕; 龚爱华

来源：江苏大学学报(医学版), 2015, 25(06): 487-490.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y150180

• 肝细胞肝癌
• 乳酸脱氢酶A
• RNA干扰

目的:观察靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝癌Hep G2细胞系的干扰效率及其对细胞增殖与迁移的影响。方法:设计合成LDHA及对照e GFP shRNA序列,克隆至真核表达质粒p LKO.1-TRC,质粒抽提纯化后测序鉴定。重组质粒用脂质体转染肝癌细胞系,采用反转录(RT)-PCR和免疫印迹检测LDHA的表达,验证shRNA的干扰效率。采用CCK-8和克隆形成实验检测干扰LDHA后细胞增殖的变化,划痕实验检测干扰LDHA对细胞迁移的影响。结果:成功构建针对LDHA和对照e GFP的shRNA表达质粒。与转染sh-e GFP组相比,转染sh-LDHA组Hep G2细胞中LDHA mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均<0.05)。与sh-e GFP组相比,sh-LDHA组72,96 h细胞增殖明显降低,克隆形成数减少,细胞迁移距离短(P均<0.05)。结论:LDHA的干扰质粒能有效干扰LDHA在肝癌Hep G2细胞中的表达,明显抑制Hep G2细胞的增殖活力和迁移能力。

• 出版日期2015
• 单位江苏大学