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摘要
运用PCR扩增技术,以质粒pMD18-T-DNaseB为模板,扩增出0.5 kb截短的DNaseB基因,先将该基因片段与pMD19-T载体连接,确定该序列正确并进行大量繁殖后,再将DNaseB基因定向克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建新的原核表达载体pET-28a(+)-DNaseB,转化该重组质粒至受体菌E.coli DH5a中,采用SDS碱裂解法提取该质粒DNA,经EcoR I和Hind双酶切鉴定和核苷酸序列分析,证实插入的基因片段具有正确的DNaseB基因核苷酸序列,将pET-28a(+)-DNaseB转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导其目的蛋白得到了表达.
- 出版日期2007
- 单位福建师范大学; 福建省立医院
