利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造(英文)

作者：李佳; 林瑛; 张秀丽; 扬子江; 贾秋品; 孟清

来源：Agricultural Science & Technology, 2012, (04): 727-730.

DOI：10.16175/j.cnki.1009-4229.2012.04.009

• 搭桥PCR(Overlap PCR)
• 蛋白质内含子改造
• 引物设计
• 蛋白质内含子应用 Overlap-extension PCR
• Reconstruction of intein
• Primer design
• Application of intein

[目的]利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造。[方法]根据搭桥PCR中寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板的原则设计多对引物,通过多次PCR扩增获得目的基因片段,进而实现对蛋白质内含子HP在基因水平上进行多个位点同时定点突变和添加Linker。[结果]搭桥PCR产物克隆经DNA测序分析,证明蛋白质内含子HP内部的4个半胱氨酸成功突变成丝氨酸,几个PCR前体片段也无缝的融合成HP基因片段,而且没有引进任何其他突变;经DNA测序,46bp的DNALinker成功的插入到设计好的HP基因序列中,且没有任何碱基突变和错配。[结论]该研究不仅实现了对蛋白质内含子HP的快速改造,而且扩大了...

• 出版日期2012
• 单位东华大学